前体RNA可由酶Dicer的作用加工，其将长双链RNA分子切割成适用于siRNA和miRNA的短双链片段。 因此，进行本发明时，本领域技术人员可使用合适的前体，其通过酶Dicer的作用被原位(体内)加工为合适和有效的siRNA分子。 在一些实施方式中，siRNA可靶向基因组DNA并阻止或干扰基因转录。
存在CGB1和/或CGB2基因的表达产物指示分泌hCGβ的癌症。 这些癌症是侵略性癌症形式，即转移性或侵染性，且通常具有较差的存活预后。 因此，检测CGB1和/或CGB2基因的表达产物可诊断是否存在癌性病症，并可用于筛选对象以鉴定具有癌性病症的那些对象的方法。 例如，这些方法可用于鉴定某一治疗方案是否有效，表达产物水平的降低可显示存在的癌性细胞数目的减少。
这发生在一条核酸含有与另一条反向或互补的序列时(相同的排列形成基因组中DNA的正义和反义链的天然相互作用并成为双螺旋构象的基础)。 为形成双链体，杂交区域之间无需完全互补；仅需要配对碱基的数目足以在使用的杂交条件下维持双链体。 例如，42℃下0.2×SSC/0.1％SDS(中等严谨性的条件)；和68℃下0.1×SSC(高严谨性的条件)。 可仅使用一种给定的条件进行清洗，或可使用各条件(例如以上文所列顺序每次清洗10-15分钟)。 引物和/或探针必须与CGB2和/或CGB1基因转录产物(如230bp转录产物)具有足够水平的相同性，使得其可在合适条件下与转录产物杂交。 脸癌 可仅使用一种给定的条件进行清洗，或使用各条件(例如以上文所列顺序每次清洗10-15分钟)。
虽然存在相关应用，但很少使用hCG的β亚基(hCGβ)。 HCG是一种糖肽激素，其由胎儿胎盘的合胞滋养层产生，并且分子量为约36千道尔顿。 其可通过在受精后数天内基于母体血清和尿液中的免疫测定来检测。 完整的hCG分子是异质二聚体，其包含特定的β亚基，该亚基非共价结合至α亚基，这对于其它糖蛋白是常见的。 HCGβ异位表达于所有上皮癌症的约32％中且与较差预后、快速转移和早期死亡相关。
对照(非感染细胞)与接触对照载体非靶shRNA的细胞之间在hCGβ转录本水平、蛋白质分泌和细胞生长方面存在小于5％的差异(参见图5)。 在测试的所有膀胱癌(SCaBER、T24、RT112)、乳腺癌(C2235、C2238)和前列腺癌(LN-CAP、PC-3)细胞系中，都检测到CGB、CGB5、7和8的转录本(图2-A)。 胎盘对照组织也显示存在CGB、CGB5、7、8转录本。 标准化的平均交点值在癌细胞之间存在差异且显示CGB基因在所选癌细胞系中的不同表达水平。 MultiNA系统上qPCR产物的分离确认存在具有经计算大小的预测的PCR产物(图2-B)。 CGB1、2基因的转录本仅发现于膀胱癌细胞系SCaBER和RT112和乳腺癌细胞系C2235中(图2-A)。
One Solution细胞增殖试验试剂(普洛麦格公司)替换生长培养基并将细胞在37℃下在具有95％空气、5％CO2的潮湿的气氛中孵育1-4小时直至显色。 在ANOVA或Friedman双向分析中使用Stats 脸癌 DirectTM(埃尔垂卡姆公司，英国柴郡)软件分析统计学显著性(数据未正常分配)。 较低丰度高分子量qPCR产物(396bp–图2-B)对应于睾丸和胎盘中前述基因CGB1/2的剪接变体之一。 存在该剪接变体包括来自内含子1的额外166个碱基对(由MultiNA分离系统测得为165)。
起始密码子–ATG1和ATG2对应于替代性开放阅读框。 这些细胞系获自美国典型培养物保藏中心(美国玛纳萨斯)和欧洲动物细胞培养物保藏中心(英国多塞特郡波顿镇)。 细胞在37℃和5％CO2下培养于附加有10％胎牛血清(英杰公司)和5％抗生素的RPMI-1640介质(英杰公司)中。
HCGβ-LHβ基因簇，显示CGB基因、LHB和SNAR的相对位置。 对于眼或其他外部组织(如嘴和皮肤)的应用，这些制剂优选以局部油膏剂或乳膏剂的形式施用。 脸癌 当配制为油膏剂时，活性成分可与石蜡或水混溶性油膏基质联用。 或者，活性成分可用水包油乳膏基质或油包水基质配制为乳膏剂。
因此，核酸形式的CGB2和/或CGB1基因产物抑制剂(如230bp剪接变体抑制剂)可具有与靶核酸或其区段反向互补(反义)的序列。 在另一个方面中，本发明提供了用于医疗(具体而言用于治疗hCGβ分泌性癌性病症)的能够降低分泌性hCGβ水平的试剂。 脸癌 在相关的方面中，本发明提供了一种药物组合物，其包含能够降低分泌性hCGβ水平的试剂和药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂。 “抗原结合结构域”是抗体的一部分，其包含特异性结合翻译自CG基因产物的前蛋白或蛋白质的一部分或全部的区域。
SiRNA(也称作小干扰RNA或沉默RNA)是可用于干扰特定基因表达的一类双链RNA分子。 SiRNA分子存在于自然中，但也可在实验上用于抑制体外或体内的基因表达。 这可通过靶向mRNA以降解、阻止mRNA翻译或通过建立沉默的染色质区域来实现。
适用于透皮给药的药物制剂的形式可以是离散贴片，其旨在与接受者的表皮保留延长时间的紧密接触。 脸癌 例如，可通过离子电渗从贴片中递送活性成分，参见PharmaceuticalResearch,3,318。 适用于口服给药的药物制剂的形式可以是离散单元如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫剂或发泡剂；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。 与目前可获得的平行程度相比(现有技术DNA测序仪上单个毛细管内的96桑格测序反应)，整个晶片高密度寡核苷酸阵列可具有分析6000万个反应的容量(例如参见网站)。
带电表面特别适用于避免表面上核苷酸的非特异性相互作用。 适当的表面包衣包括聚乙胺(参见Braslavsky,2003)和可获自VBC基因组公司(奥地利)的DNA结合载玻片。 表面处生成的电场是一种控制表面处核苷酸的吸引和排斥的有用方法(Asanov1998；Sosnowski1997)。 最初完成LH-CGβ/基因簇的完整克隆后，其他研究表明存在两类生成hCGβ的基因，称作类型I和II。 类型I指似乎导致合成117位处具有丙氨酸残基的hCGβ蛋白的CGB7的基因产物且类型II指CGB、CGB5和CGB8的基因产物(其在117位处均编码天冬氨酸残基)。 脸癌 这些研究形成了JMBidart美国专利号6,194,154的基础。
+47bp变体的替代性理论形式将来自ORF再偏移至经典hCGβ编码转录本且可因此从内含子1的中部生成额外的短转录本(基本是另一个外显子，称作外显子1b)。 替代性mRNA+166bp和+176bp可理论上编码长度为约60个氨基酸的较短多肽。 图2显示微芯片电泳系统MultiNA上qPCR产物的电泳和电泳图。
- 与胎盘对照样品相比，乳腺癌细胞系C2335显示高32倍的CGB1/2 mRNA表达(参见表1)。
- 使用血球计数器估计培养后细胞数目并将其用于标准化蛋白质浓度(1×106个细胞)。
- 阵列合成或制备生成阵列的寡核苷酸期间，UniCap亚磷酰胺(格兰研究公司)可用于在寡核苷酸合成中进行有效的加帽。
- 13.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，检测和/或测量CGB2和/或CGB1基因的表达产物包括检测肽、蛋白质或前蛋白的水平。
- 数据标准化至非靶shRNA转导的细胞所测得的水平(设为100％)。
- 类似地，克隆1和克隆2的培养基中的hCGβ蛋白浓度分别下降至20％和9％。
针对未处理的对照达到的光学密度标准化数据并表达为细胞数目变化百分比。 脸癌 随后收集板之间的数据并表示为来自五次实验的标准化的细胞群体中的平均值和标准差变化。 在ANOVA或Friedman双向分析中使用StatsDirectTM(埃尔垂卡姆公司，英国柴郡)软件分析统计学显著性(数据未正常分配)。
对照载体pLKO.1-puro(无shRNA插入)(西格玛奥德里奇公司，英国普尔)以及未处理的野生型细胞。 应理解，下文和/或附图中显示的多种特征是优选的而非必需的。 除非另有说明，实际应用时，可忽略、改变或以不同组合合并单个特征。 适用于通过吸入给药的药物制剂包括可通过各种类型的计量加压气溶胶、喷雾器或吸入器的方式产生的细颗粒粉剂或喷雾剂。 适用于经鼻给药的药物制剂(其中运载体是固体)包括粒度范围为20-500微米的粗粉末，其以摄取鼻烟的方式给予，即从保持在靠近鼻部的处的粉末容器中通过鼻部通道迅速吸入。