結合至癌症抗原後，抗體可誘導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性、激活補體系統及防止受體與其配體(諸如Globo H)相互作用。 在一實施例中，包含本文所述抗-Globo H-結合肽或抗-Globo H抗體之組合物可用於抗癌症療法。 此外，包含抗-Globo H-結合肽或抗-Globo H抗體之組合物可與其他抗腫瘤劑組合。 特定言之，本實施例提供特異性抗-Globo H抗體之互補決定區序列，其可用於各種抗-Globo H-結合肽中。
具體的有效或充足量將隨以下因素而變化：諸如接受治療之特定病狀、患者之身體條件(例如患者之體質量、年齡或性別)、接受治療之哺乳動物或動物類型、治療持續期、並行療法(若有)之性質及所用具體調配物及化合物或其衍生物之結構。 Globo H係一種六醣且屬於大量過度表現於各種上皮癌細胞(包括乳癌細胞、結腸癌細胞、卵巢癌細胞、胰臟癌細胞、肺癌細胞及前列腺癌細胞)表面上之腫瘤相關聯醣類抗原。 Globo H之異常表現使其成為免疫療法及研發Globo H-陽性癌症之癌症疫苗之吸引人候選者。 抗免疫原性醣肽之抗體，包含彼等之組合物及其用途 本發明係關於癌症之免疫療法領域。 更特定言之，本發明係關於抗免疫原性醣肽之抗體，含該抗體之醫藥組合物及其於癌症療法中之用途。
在另一實施例中，本發明提供一種人源化抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含選自由SEQ ID NO：80至103組成之群之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含選自由SEQ ID 腫瘤照片 NO：104至139組成之群之胺基酸序列。 本文揭示特異性結合至至少一種由免疫原性醣肽所界定之抗原決定基之抗體。 本發明之其他態樣係含該抗體之醫藥組合物；及用於預防及/或治療Globo-H-陽性癌症之方法。
然後將50μL珠粒混合物轉移至V型底96孔盤，並與50μL以1：1000稀釋之血清或1μg/mL MZ-2抗體混合。 培育30分鐘後，用150μL清洗緩衝液清洗珠粒，並另外用100μL PE-共軛2Ab染色。 圖3顯示，MZ-2抗體之特異性係由MZ-2及嵌合MZ-2抗體僅結合至Globo H-共軛珠粒，但不結合至SSEA3-或SSEA4-共軛珠粒之事實指示。 提供以下實例來闡述本發明之某些態樣及協助熟習此項技術者實施本發明。 腫瘤照片 無需進一步詳述，據信熟習此項技術者基於本文描述即可最大限度使用本發明。
在操作時，人源化抗體通常係其中一些CDR殘基及可能一些FR殘基經非人類(例如，嚙齒動物)抗體中類似位點之殘基取代之人類抗體。 在另一實施例中，抗體或抗體片段可自利用已知之習知技術產生之抗體噬菌體集合庫中單離；例如使用噬菌體集合庫分別單離鼠科及人類抗體。 後續公開案描述藉由鏈改組生產高親和力(nM範圍)人類抗體、以及組合感染及活體內重組作為構築極大型噬菌體集合庫之策略。 因此，此等技術係用於單離單株抗體之習知單株抗體融合瘤技術之可行替代。 腫瘤照片 在一態樣中，本發明提供一種輕鏈可變區，其包括選自由SEQ ID NO：10至13組成之群之L-CDR1、選自由SEQ ID NO：14至16組成之群之L-CDR2及選自由SEQ ID NO：17至19組成之群之L-CDR3。 在另一實施例中，本發明提供一種輕鏈可變區，其包含作為L-CDR1之SEQ ID NO：12、作為L-CDR2之SEQ ID NO：16及作為L-CDR3之SEQ ID NO：18。
至少，各數字參數應至少根據所報告之有效數字及藉由應用普通捨入法理解。 如請求項11之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包括包含由SEQ ID NO：90組成之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含由SEQ ID NO：135組成之胺基酸序列之輕鏈可變區。 使如本文所述之具有重鏈可變區及輕鏈可變區之本發明抗體接受實例2之結合親和力分析、實例5之締合及解離分析、實例6之CDC分析、實例7之ADCC分析及實例8之抗腫瘤分析，且顯示與cMZ-2抗體、hMZ-2Lw抗體及MK-1抗體類似之結果。 例如，具有SEQ ID NO：27之重鏈可變區及SEQ ID NO：231之輕鏈可變區的抗體之KD值係在1 x 10-7至1 x 10-10nM之範圍內。 片語「醫藥上可接受的」係指彼等在合理範圍的醫療判斷下適於與人類及動物組織接觸而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問 題或併發症，且符合合理的效益/風險比之化合物、材料、組合物及/或劑型。
為實現此目標，根據一較佳方法，藉由使用 親本及人源化序列之三維模型分析親本序列及各種概念人源化產品之方法製備人源化抗體。 可獲得說明及顯示選定候選免疫球蛋白序列之可能三維構型結構之電腦程式。 檢查此等顯示物即可分析殘基在候選免疫球蛋白序列之功能中之可能作用，亦即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力之殘基。 以此方式，FR殘基可選自接受者及輸入序列並組合，使得達到期望抗體特性，諸如提高針對目標抗原之親和力。
將hMZ-2抗體、hMz-2Lw(重鏈可變區：SEQ ID No.27；輕鏈可變區SEQ ID No.75)及MK1(重鏈可變區：SEQ ID No.290；輕鏈可變區SEQ ID No.135)用於以下實例中。 在一些實施例中，將如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分或包含如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分之醫藥組合物投與至患有癌症之個體，該癌症欲藉由全身遞送該製劑或遞送至所需表面或目標之任何投與模式抑制，且投與模式可包括(但不限於)注射、輸注、滴注及吸入投與。 在如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分或包含如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分之醫藥組合物可保護免於在腸中滅活之程度而言，亦涵蓋口服投與形式。 「注射」包括(但不限於)靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、室內、囊內、眼窩內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊柱內、大腦脊柱內及胸骨內注射及輸注。 在一較佳實施例中，用於本文所述方法中之如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分或包含如本文所述之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分之醫藥組合物係藉由靜脈內輸注或注射投與。 另外，重要的是，使經人源化之抗體保留有針對抗原之高親和力及其他有利生物性質。
- 在一些實施例中，本文所述抗-Globo H抗體或其抗原結合部分可與任何醫藥上可接受之載劑化合物、材料或組合物一起投與，其導致有效治療個體。
- 在處理後24天時，提供hMZ-2Lw抗體之小鼠中之腫瘤幾近消失。
- 參見例如Morrison,Science 229：1202 ；Oi等人，BioTechniques 4：214；Gillies等人，J.Immunol.Methods 125： ；美國專利案第5,807,715號、第4,816,567號及第4,816,397號。
- 如本文所使用之片語「非經腸投與」及「經非經腸投與」係指 不同於經腸及局部投與之投與模式，通常藉由注射。
如本文所使用，「醫藥上可接受的載劑」為適合個體使用，而無不當的有害副作用(諸如毒性、刺激及過敏反應)且符合合理的效益/風險比者。 同樣，在與醫藥組合物之其他成分相容之意義上，各載體必須係「可接受」。 在與調配物之其他成分相容之意義上，載體必須係「可接受」，且經選擇以最大限度減少活性劑之任何降解及最大限度減少在個體中之任何有害副作用。 如本文所使用，術語「治療上有效量」係指活性組分足以產生期望治療反應之量。
如請求項1之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：87或90之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：135之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列。 如請求項1之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：27或30之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：75或231之胺基酸序列具有至少80%一致性之胺基酸序列。 如請求項1之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：147或150之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含相對於SEQ ID NO：195或198之胺基酸序列具有至少80%一致性之胺基酸序列。 如本文所使用之術語「抗體」係指能識別或結合抗原之完整抗體分子或者其片段、變異體或衍生物。 輕鏈包括一個可變域及一個恆定域；而重鏈包括一個可變域及三個恆定域(CH1、CH2及CH3，統稱為CH)。 VH及VL區可進一步細分為具有超變性之區域，稱為互補決定區，其間穿插有較保守之區域，稱為框架區。
為建立腹膜內卵巢腫瘤模型，將1 x 106個TOV21G細胞經腹膜內(i.p.)注射至5週齡雌性NU/NU小鼠中。 兩天後，將小鼠分成4組，並經由尾部靜脈(i.v.)途徑投與100μg(以5mg/kg之治療劑量)人類IgG、抗-GloboH抗體hMZ-2Lw或MK1，一週兩次。 為監測腫瘤生長，在各不同批次實驗中，給荷瘤小鼠i.p.注射200μL螢光素(3.9mg/ml)，並藉由非侵入式IVIS系統以固定曝露條件檢測各小鼠之化學發光強度。 圖11中之代表性照片顯示，投與hMZ-2Lw及MK1抗體均顯著抑制腫瘤生長，而對照IgG抗體實質上不影響腫瘤生長。
圖15顯示，MZ-2抗體抑制表現Globo H之TOV21G細胞之遷移。 簡而言之，在1mL培養基中混合2×105個Globo H-陽性TOV21G細胞及5μg小鼠IgG1同型物或MZ-2抗體(hMZ-2Lw)，並在37℃下培育15分鐘。 然後用1x PBS清洗此等細胞三次，並再懸浮於培養基中至2×105個/mL。 將一百微升細胞轉移至轉移盤之插片中，並在CO2培養箱中培育24小時。 圖14顯示，MZ-2抗體抑制表現Globo H之TOV21G細胞之遷移。 藉由Biolayer干涉儀，使用FortrBio OcTet系統檢測抗-Globo H抗體之結合親和力。
簡而言之，在0.5mL培養基中混合2×105個表現Globo H之TOV21G細胞及5μg小鼠IgG1同型物或MZ-2抗體(hMZ-2Lw)，並在37℃下培育15分鐘。 然後用1x PBS清洗彼等細胞三次，並再懸浮於培養基中至4×105個/mL。 將一百微升細胞轉移至24-孔盤之創傷愈合培養插片(Ibid目錄號80241)之孔中，並在CO2培養箱中培育8小時。 使用未經抗體處理之細胞或Globo H-陰性TOV21G細胞作為對照。 注意，經MZ-2抗 體處理之細胞間隔大於經IgG1同型物對照處理者。
更佳家族係：絲胺酸及蘇胺酸係脂族羥基家族；天冬醯胺及穀胺醯胺係含醯胺家族；丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸係脂族家族；且苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸係芳族家族。 例如，可合理地預期，單獨用異白胺酸或纈胺酸置換白胺酸，用榖胺酸置換天冬胺酸，用絲胺酸置換蘇胺酸，或類似地用結構相關胺基酸置換胺基酸將不會對所得分子之結合或性質具有重大影響，特別係在該置換並未涉及框架部位內之胺基酸之情形下。 可藉由分析多肽衍生物之特異活性，輕易確定胺基酸變化是否產生功能肽。
如本文所使用之片語「非經腸投與」及「經非經腸投與」係指 不同於經腸及局部投與之投與模式，通常藉由注射。 如本文所使用之片語「全身投與」、「經全身投與」、「周邊投與」及「經周邊投與」係指不同於直接進入目標位點、組織或器官(諸如腫瘤位點)地投與雙特異性或多特異性多肽劑，以使得其進入個體之循環系統，且因此經歷代謝及其他類似過程。 在另一實施例中，本發明單離之抗-Globo H抗體係能特異性結合至Globo H之人源化或嵌合抗體或者其片段。 術語「抗原決定基」係指習知上藉由免疫球蛋白VH/VL對結合之結構單元。
抗原決定基界定抗體之最小結合部位，且因此代表抗體之特異性之目標。 此外，就具有免疫低下狀態之癌症患者而言，特定言之在接受化療或輻射療法之患者以及晚期癌症患者中，主動免疫干預之療效通常有限，因為此等患者可能無法產生足夠引發抗腫瘤效應之抗體。 然而，如同大多數醣類抗原一樣，Globo H通常為免疫系統所耐受，且因此，Globo H所誘導之免疫原性有限。 另外，生產抗特異性免疫原之抗體通常涉及到兩種淋巴細胞(B細胞及輔助T細胞)之協同相互作用。 但是，Globo H無法單獨激活輔助T細胞，其亦歸因於Globo H之免疫原性差。 因此，以Globo H之免疫接種通常具有以下特徵：免疫球蛋白M之效價低及無法類別轉化為免疫球蛋白G，及抗體親和力成熟作用無效。
除非本文另有定義，否則本發明中所用科學及技術術語應具有一般技術者通常理解及使用之含義。 除非上下文另有要求，否則應理解，單數術語應包括其複數形式，且複數術語包括單數。 具體言之，如本文及申請專利範圍中所使用，除非上下文另有明確指示，否則單數形式「一」及「一」包括複數形式。 同樣，如本文及申請專利範圍中所使用，術語「至少一」及「一或多」具有相同含義，且包括一、二、三或更多。 根據本發明之一實施例，該醫藥組合物包含治療上有效量之如本發明之任何上述態樣/實施例之抗體，及視情況醫藥上可接受之載劑。 一種如請求項1至16中之任一單離之抗-Globo H抗體或其抗原結 合部分之用途，其係用於製造供治療及/或預防Globo H-陽性癌症之藥物。
如請求項11之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：87或90組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：135組成之胺基酸序列。 如請求項7之單離之抗-Globo H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：27或30組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：75或231組成之胺基酸序列。 如請求項3之單離之抗-Globo 腫瘤照片 H抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，其包含由SEQ ID 腫瘤照片 NO：147組成之胺基酸序列，及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO：195組成之胺基酸序列。