藉由注射後注射器中之衰變校正剩餘活性減去注射前注射器中之衰變校正活性來計算注射劑量。 具有DOTA|DOTAGA-烷基-[芳族]-DP核之化合物(第IIA族)及其活體內分析結果概述於表7中。 在本發明之一些實施例中，本發明之靶向FAP之藥劑與溶瘤病毒結合投與。
在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑為特異性結合CTLA-4之抗體。 在一些實施例中，結合CTLA-4之抗體為伊派利單抗 或曲美木單抗 (CP-675,206)。 在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑為CTLA-4融合蛋白，例如KAHR-102。
較佳地，炔基鏈包含2至8個碳原子，亦即，2、3、4、5、6、7、或8個，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、己炔基、戊炔基、辛炔基。 術語「烯基」及「環烯基」係指含有具有一或多個雙鍵之鏈或環之烯烴不飽和碳原子。 較佳地，烯基鏈包含2至8個碳原子，亦即，2、3、4、5、6、7或8個，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、異丁烯基、二級丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、己烯基、戊烯基、辛烯基。 較佳地，環烯基環包含3至8個碳原子，亦即，3、4、5、6、7或8個，例如1-環丙烯基、2-環丙烯基、1-環丁烯基、2-環丁烯基、1-環戊烯基、2-環戊烯基、3-環戊烯基、環己烯基、環戊烯基、環辛烯基。 且本發明之另一態樣提供用於診斷、造影或減少動物(較佳人類患者)組織過度表現FAP之方法，其包含向該動物投與式I-V中任一者之至少一種化合物。
所有動物實驗經大學健康網路(University Health Network，UHN)動物管理委員會批准且遵守加拿大動物管理委員會之道德指南。 動物圈養在恆溫(20℃)及40%相對濕度下，按照12小時光照/12小時黑暗之時程且可任意獲取食物及水。 具有DOTA|DOTAGA-n-[芳族]-DP核之化合物(第II族)及其活體內分析結果概述於表6中。 在一些實施例中，CD27促效劑為特異性結合CD27之抗體。 在一些實施例中，結合CD27之抗體為瓦里木單抗 (CDX-1127)。
其他實施例包括羥基烷基、羥基環烷基、羥基芳基、羥基芳烷基、羥基烯基、羥基環烯基、羥基啉基、巰基烷基、巰基環烷基、巰基芳基、巰基芳烷基、巰基烯基、巰基環烯基、巰基炔基、胺基烷基、胺基環烷基、胺基芳基、胺基芳烷基、胺基烯基、胺基環烯基、胺基炔基。 實施例包括烷氧基、環烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烯基氧基、環烯基氧基、炔氧基、烷硫基、環烷基硫基、芳硫基、芳烷基硫基、烯基硫基、環烯基硫基、炔基硫基、烷基胺基、環烷胺基、芳基胺基、芳烷基胺基、烯基胺基、環烯基胺基、炔基胺基。 式 IV或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R、R1、R2、R3、R4、X及L如上文所定義；且 n表示2與6之間的整數。
當靜脈內投與醫藥組合物時，生理鹽水溶液為較佳載劑。 亦可使用生理食鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作為液體載劑，尤其用於可注射溶液。 適合的醫藥賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、無水脫脂牛奶、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。 必要時，組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH緩衝劑。 Martin之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」中。 化合物 6952GA 使用具有UV偵測器(在215 nm處監測)、含有Luna C18 (4.6 mm×150 mm，3.0 μm，100A管柱)之Hewlett Packard HP 腫瘤潰爛 LC/MSD系統進行LCMS方法。
對於iTLC分析，將1 μL經稀釋之標記溶液塗覆至一條iTLC-SA層析紙(Agilent P/N A120B12，114 × 2.5 mm)且於0.1 M檸檬酸鹽緩衝液中顯影(8 cm溶劑遷移)以評定游離177Lu (Rf ＞ 0.5)及-6522 (Rf約0)。 藉由高效能層析分析放射化學純度且典型地為＞70%。 可在以下條件下製備上文所描繪之放射性藥品-6522：將73 nmol放射性化學前驅體6522 (上述實例5)、0.5 M乙酸鈉、0.4 M N-乙醯基甲硫胺酸及大致400 MBq GaCl3(總體積為7.875 mL，pH為4.0)在90℃下在震盪下加熱20分鐘。 使經蒸發之產物稀釋於0.6 mL 0.9%生理鹽水中且添加70 µL 1 M NaOH以將pH調節至5.0。
在一些實施例中，腫瘤為選自由以下組成之群的腫瘤：結腸直腸腫瘤、胰臟腫瘤、肺腫瘤、卵巢腫瘤、肝腫瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、前列腺腫瘤、神經內分泌腫瘤、胃腸道腫瘤、黑素瘤、子宮頸腫瘤、膀胱腫瘤、神經膠母細胞瘤及頭部及頸部腫瘤。 在本發明之一些實施例中，癌症為轉移性癌症，例如上文所描述之種類之轉移性癌症。 所選擇之聚合物可為水溶性，使得其所連接之靶向FAP之藥劑不在水性環境(諸如生理學環境)中沈澱。
在一些實施例中，免疫反應刺激劑包含1種、2種、3種或更多種免疫反應刺激劑。 在某些實施例中，放射性同位素意欲實現造影，諸如藉由SPECT造影及/或PET造影。 單光子發射電腦斷層攝影術為使用γ射線之核醫學斷層造影技術且能夠提供真實3D資訊。 歸因於同位素之γ發射，有可能參見放射性標記材料累積於患者身體之處。
舉例而言，靶向FAP之藥劑可藉由放射性閃爍攝影術、磁共振造影、電腦斷層攝影術(CT掃描)、細胞核造影、包含金屬斷層攝影術對比劑之正電子發射、光學造影(諸如螢光造影，包括近紅外螢光造影)、生物發光造影或其組合。 適用於增強此類技術之藥劑為滿足以下條件之材料：實現體內特定基因座、器官或疾病位點之觀測及/或引起藉由造影技術產生之影像之品質之某種改良，提供此等影像之經改良或更容易的說明。 此類藥劑在本文中稱為對比劑，使用其可藉由提高影像之不同區域之間的「對比度」而有助於區分影像之不同部分。 腫瘤潰爛 因此，術語「對比劑」涵蓋用於增強可在不存在此類藥劑之情況下產生之影像之品質之藥劑(如在例如MRI之情況下)，以及產生影像所必需之藥劑(如在例如細胞核造影之情況下)。 在本文所描述之方法之一些實施例中，其他治療劑包含諸如小分子之藥劑。 舉例而言，治療可涉及本發明之靶向FAP之藥劑與充當針對腫瘤相關抗原之抑制劑之小分子之組合投與，該小分子包括(但不限於) EGFR、HER2 及/或VEGF。
診斷性放射性同位素適當地可用於診斷性造影，且可尤其包括18F、123I、124I、125I、99mTc。 治療性放射性同位素適當地可用於包括治療癌症之不同療法，且可尤其包括例如225Ac、68Ga、177Lu、64Cu、67Cu、131I、32P、90Sr、90Y、186Re、188Re及189Re。 如本文所使用，術語「纖維母細胞活化蛋白」亦以術語「seprase」已知。 纖維母細胞活化蛋白為具有二肽基肽酶IV 樣褶皺之均二聚體整體蛋白，其具有α/β-水解酶結構域及八葉β-槳式結構域。 如本文所使用，術語「胺基酸」係指含有一或多個胺基取代基，例如α-胺基、β-胺基或γ-胺基之任何有機酸，脂族羧酸之衍生物。 術語「炔基」係指含有具有一或多個參鍵之鏈或環之不飽和碳原子。
另外，含有酸性NH基團之藥物(諸如咪唑、醯亞胺、吲哚及其類似物)已經N-醯氧基甲基掩蔽(Bundgaard Design of Prodrugs, 腫瘤潰爛 Elsevier )。 在其他較佳實施例中，R為包含一或多個複合放射性同位素之螯合劑。 在此類實施例之其他某些態樣中，一或多個放射性核種可為診斷性放射性同位素。 靶向FAP之放射性藥品及造影劑，與其相關用途 腫瘤生長及擴散不僅係由癌細胞決定，且還由惡性病灶的非惡性組成分決定，這些惡性病灶的非惡性組成分都歸入在術語基質之下。
靶向FAP之藥劑之治療可在化學療法投與之前、同時或之後進行。 組合投與可包括以單一醫藥調配物或使用分開的調配物共同投與，或以任一順序但通常在一段時間內連續投與以使得所有活性劑可同步發揮其生物活性。 此類化學治療劑之製備及給藥時程可根據製造商說明書使用或由熟習此項技術者根據經驗來確定。 此類化學療法之製備及給藥時程亦描述於The Chemotherapy Source Book,第4版增刊, 2008, M.
在一些實施例中，聚合物之分子量在約10,000 Da與約40,000 Da之間。 在某些實施例中，R為放射性部分，其中該放射性部分包括螢光同位素、放射性同位素、放射性藥物或其組合。 較佳地，放射性部分包括選自由以下組成之群的放射性同位素：α輻射發射同位素、β輻射發射同位素、γ輻射發射同位素、歐傑電子發射同位素、X射線發射同位素、螢光發射同位素。 掩蔽羧酸鹽陰離子之實例包括多種酯，諸如烷基(例如甲基、乙基)酯、環烷基(例如環己基)酯、芳烷基(例如苯甲基、對甲氧基苯甲基)酯及烷基羰氧基烷基(例如特戊醯氧甲基)酯。 胺已經掩蔽為經芳基羰氧基甲基取代之衍生物，其由活體內酯酶分解釋放自由藥物及甲醛(Bungaard J. Med. Chem. 2503 )。
投與可為局部的，藉由表皮或經皮貼片、軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體及散劑；經肺的，藉由吸入或吹入散劑或氣霧劑，包括藉由噴霧器；氣管內及鼻內；經口；或非經腸，包括靜脈內、動脈內、瘤內、皮下、腹膜內、肌肉內(例如注射或輸注)或顱內(例如鞘內或室內)。 例示性穩定劑化合物包括有機藥劑，例如2,5-二羥苯甲酸或其鹽、抗壞血酸或其鹽、甲硫胺酸、組胺酸、美拉通寧、N-乙醯基甲硫胺酸或乙醇，其中N-乙醯基甲硫胺酸為用於包括在本發明水性醫藥組合物中之較佳穩定劑。 可調節連接至靶向FAP之藥劑之水溶性聚合物之數目(亦即，PEG化或糖基化之程度)以提供所得靶向FAP之藥劑中之經修飾(包括(但不限於)增加或降低)之藥理學、藥物動力學或藥效學特徵，諸如活體內半衰期。 在某些實施例中，放射性同位素為錒系元素，諸如225Ac、226Th及227Th。 在某些態樣中，較佳放射性同位素包括225Ac或227Th。
聚合物分子量可在包括(但不限於)約100 Da與約100,000 Da或更大之間的廣泛範圍內。 在一些實施例中，聚合物之分子量在約100 Da與約50,000 Da之間。 在一些實施例中，聚合物之分子量在約100 Da與約40,000 Da之間。 在一些實施例中，聚合物之分子量在約1,000 Da與約40,000 Da之間。 在一些實施例中，聚合物之分子量在約5,000 Da與約40,000 Da之間。
可在以下條件下製備上文所描繪之放射性藥品-6555：將73 nmol放射性化學前驅體6555 (上述實例7)、0.5 M乙酸鈉、0.4 M N-乙醯基甲硫胺酸及大致1200 MBq GaCl3(總體積為7.875 mL，pH為4.0)在90℃下在震盪下加熱20分鐘。 反應混合物用40 mL水稀釋且使用經乙醇及水預處理之C18固相萃取濾筒純化。 使經蒸發之產物稀釋於0.5 mL磷酸鹽緩衝生理鹽水中且添加70 µL 1 M NaOH以將pH調節至5.0。
如本說明書及所附申請專利範圍中所使用，除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一」、「一」及「該」包括複數個指示物。 在術語之以下定義中：提供烷基、雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、烯基及炔基。 用FAP放射性藥品靶向CAF咸信具有多種抗腫瘤作用模式，但主要依賴於藉由自療法靶向之相鄰CAF局部發射之電離輻射來誘導腫瘤細胞之DNA損傷。 靶向FAP之放射線療法可將電離輻射直接遞送至CAF且經由交射作用亦遞送至癌細胞。 組合α-發射體及β-發射體可經由短程α-輻射至CAF及中程至長程β-輻射至癌細胞來提高此等雙重抗腫瘤作用。 本發明之又一態樣提供一種套組，其包含以下或由以下組成：式I-V中任一者之至少一種化合物；及用於診斷或治療疾病之說明書。
實例15：活體外分析二肽基肽酶IV、纖維母細胞活化蛋白及脯胺醯基寡肽酶 此分析之目的為測定不同抑制劑針對重組人類二肽基肽酶IV 、纖維母細胞活化蛋白或脯胺醯基寡肽酶之IC50。 在一些實施例中，免疫反應刺激劑包括(但不限於)細胞介素，諸如趨化因子、干擾素、介白素、淋巴介質及腫瘤壞死因子家族之成員。 在一些實施例中，免疫反應刺激劑包括免疫刺激性寡核苷酸，諸如CpG二核苷酸。 腫瘤潰爛 在一些實施例中，GITR促效劑包含GITR配位體或其GITR結合部分。 在一些實施例中，GITR促效劑為特異性結合GITR之抗體。 在一些實施例中，結合GITR之抗體為TRX518、MK-4166或INBRX-110。
梯度溶離系統為所利用之流動相A 及流動相B (乙腈)。 用1.0 mL/min之流動速率，以98% A及2% B持續5分鐘開始；且歷經15分鐘提高至74% A及26% B；隨後歷經5分鐘提高至2% A及98% B來執行梯度。 使用來自Agilent之Chemstation軟體分析資料。
在一些實施例中，LAG3拮抗劑為特異性結合LAG3之抗體。 在一些實施例中，結合LAG3之抗體為IMP701、IMP731、BMS 腫瘤潰爛 、LAG525及GSK 。 在一些實施例中，LAG3拮抗劑包括可溶性LAG3受體，例如IMP321。
- 產物經無菌過濾(Millex-GV，0.22 µm)。
- 本發明之某些化合物可以未溶劑化形式以及溶劑化形式(包括水合形式)存在。
- 實例 24 ： 療效及存活研究研究目標為藉由評估腫瘤生長延遲及中值存活期來評定單次注射177Lu-PNT2004 (-6522)之治療功效。
- 與其中需要保持融合搭配物之三維摺疊之HSA及Fc肽融合物不同，在許多情況下，與非結構化搭配物之重組融合物可經歷更高溫度或嚴格條件，諸如HPLC純化。
- 在一些實施例中，組合療法使得靶向FAP之藥劑之毒性及/或副作用降低。
- 在一些實施例中，組合療法包含影響免疫反應(例如增強或活化反應)之治療劑及影響(例如抑制或殺滅)腫瘤/癌細胞之治療劑。
酸之5員至8員環； R3表示H或(C1-C6)烷基； R4不存在或表示一個、兩個或三個各自獨立地選自由以下組成之群的取代基：(C1-C6)烷基、-OH、-NH2及鹵素； X表示O或S； L表示一鍵或連接基團。 177Lu-PNT2004 (-6522)以3種濃度提供，準備好注射(80 µL/小鼠)，且使用井式計數器(Capintec校準)#430×10測定注射劑量。 HEK-mFAP細胞株接種後4天量測動物體重並記錄，且監測直至注射放射性示蹤劑當天。