由圖8可見，與正常對照組相較之下，病理對照組測得的冷光強度有顯著的增加。 本實驗結果顯示，本發明戈氏副擬桿菌菌株MTS01在活體內植入LLC細胞之後的第14天之時具有抗肺癌效用。 圖7是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在活體內植入LLC細胞之後的第7天之時抗肺癌上的效用之活體分子影像圖。 由圖7可見，與正常對照組相較之下，病理對照組測得的冷光強度有顯著的增加。
- 實施例3 I7457與I7557增強人類胰臟癌細胞對放射線處理之感受性 在本實施例中，發明人探究了本發明化合物I7457與I7557，對胰臟癌細胞株Panc-1及BxPc-3接受放射線處理的感受性之影響。
- 分別利用細胞存活與細胞週期分析以及免疫墨點分析與劉氏染色法來評估I7457與I7557的抑制生長活性。
- 在特定實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少5%(重量%)。
- 對81T/VGH細胞而言，細胞存活率分析結果顯示，經過20μM 之I7457與I7557處理48小時後，相較於對照組細胞，兩化合物均能夠有效地減少癌細胞數目至少50%(表5)。
- 上述這些發現，暗示本發明化合物可作為能治療癌症(包括具抗藥性之癌症)之醫療性藥劑的先導化合物。
透過在4℃下以8,000×g離心10分鐘獲得細胞沉澱物。 透過將經培養的細菌細胞懸浮於無氧PBS中(具有最終細胞密度為1×109CFU)來製備用於口服投藥的細胞懸浮液。 此外，於製備包含本發明實施例之戈氏副擬桿菌之醫藥組成物時，亦可進一步加入所屬技術領域所熟知之賦形劑、載劑、輔劑及/或食品添加劑。 化學藥物治療 且其劑型可為但不限於一噴霧氣體、一溶液、一半固態、一固態、一明膠膠囊、一軟膠囊、一錠劑、一口含片、一口香糖及/或一冷凍乾燥粉末製劑。 同時，本發明實施例之戈氏副擬桿菌或包含其他成分的醫藥組成物，亦可進一步用於製備食品、保健食品、膳食補充品或疫苗組合物。
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需知以上的概述及以下的詳細說明僅為例示，用來闡述本揭示內容，而非用以限制本揭示內容之範疇。 攝護腺癌早期通常沒有明顯症狀，隨著腫瘤變大可能壓迫尿道導致解尿困難、頻尿、夜尿、尿失禁，解尿時斷斷續續，無法說尿就尿。 部分患者可能會出現「血精」，也就是精液中帶血，或是射精疼痛。 依據本發明的醫藥組成物可以一選自於由下列所構成的群組中的非經腸道途徑來投藥：腹膜內注射、皮下注射、肌肉內注射以及靜脈內注射。 定義 本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
接著，將正常對照組、病理對照組及實驗組小鼠的肺葉固定於10%中性緩衝福馬林(neutral-buffered formalin)中處理，然後以石蠟包埋並切成4μm的厚度。 之後，使用玻片掃描儀對蘇木精與曙紅(Hematoxylin and Eosin,H&E)染色的肺部進行組織學檢查，並對整個肺葉拍照。 使用H&E染 色的肺部切片進行全玻片掃描及500μm或250μm光學變焦的代表性影像。 為了研究戈氏副擬桿菌對改善LLC引起的體重減輕的影響，在實驗期間的4週內每週監測各組小鼠的體重。 體重增加的計算公式為最終體重(4週)減去起點體重(0週)。 本實施例中所用之戈氏副擬桿菌(Parabacteroides goldsteinii,P.goldsteinii)MTS01是一種能治療肺癌的益生菌株。
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該菌長期保存於-80℃冰箱，保護液為25%之甘油，無須特殊降溫處理，且可經由冷凍乾燥進行保存，以穩定其活性。 當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。 上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。 雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 化學藥物治療 第1與2圖分別繪示出I7457與I7557對於抗伊馬替尼CML細胞之細胞存活率的影響。
此外，相較於對照組細胞(第3A圖)，經過20 μM的I7457(第3B圖)或I7557(第3B圖)處理的CML細胞開始變圓，而使其外觀呈氣球狀，這意味著CML細胞正經歷細胞凋亡與有絲分裂風暴。 對經藥物處理之CML細胞進行α-與β-微管蛋白之染色分析(資料未顯示)以及免疫墨點分析的結果，也進一步證實了上述的有絲分裂事件。 第4圖繪示出利用免疫墨點分析所測定之經藥物處理之CML細胞中β-微管蛋白的含量，由圖中可以看出，與對照組細胞相較之下，利用I7457與I7557治療可分別降低細胞中β-微管蛋白的含量。 治療有效量同時也是指化合物或組合物所致的毒性或有害的效果不及於其所帶來的治療利益。 在較佳的情形中，本發明之化合物或組合物於投藥時，應採用適當的劑量並持續一段時間，以使得症狀的數目和/或嚴重性得以降低。
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只有在細胞存活時，才能進行這種還原作用；因此通常會利用MTT分析來評估細胞存活與增殖的能力。 簡言之，使細胞和10或20 μM的試驗化合物(如，I7457 化學藥物治療 or I7557)接觸48或72小時；之後加入MTT染料(500 μg/ml)，並讓還原反應進行4小時；而後加入500 μl的異丙醇以終止還原反應。 所述實施方式與專有名詞是為了闡述發明內容之用，並非用以限制本揭示內容範疇。 本揭示內容範疇也涵蓋並未特意揭示於此，但習知技藝人士在閱讀過本揭示內容後可輕易推知的其他實施方式。
- 本發明之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯化合物較佳是自山葵中分離而得。
- 一種用來延緩活體外多數癌症細胞生長的方法，包含施用一有效量如請求項9所述之6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類，其中該癌症為胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌或食道癌。
- 此藥學組合物包括一治療有效量之上述本發明化合物；以及一藥學上可接受的輔劑。
- 在另一實施例中，可透過本發明兩種化合物之任一種進行治療的癌症是對化學藥物治療不敏感的NSCLC。
高分子輔劑的實施例包括但不限於丙烯酸聚合物與共聚物；水解聚乙烯醇；聚乙烯氧化物；聚丙烯酸酯；乙烯聚合物與共聚物；聚乙烯吡咯啶；葡萄糖；瓜膠；果膠；澱粉；及纖維素聚合物。 在某些實施方式中，上述本發明之醫藥品或是藥學組合物中更包括另一種已知可改善癌症治療效果的藥劑。 這類藥劑的實例包括，但不限於，抗癌藥物、抗血管增生藥物、抗病毒藥物、抗生素、減輕疼痛藥物、抗貧血藥物、細胞激素、G-CSF、抗嘔吐藥物以及其他類似物。
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在較佳實施方式中，可經由口服方式(如，透過食物)將本發明化合物投予個體。 此藥學組合物包括一治療有效量之上述本發明化合物；以及一藥學上可接受的輔劑。 因此，本揭示內容第二態樣是提供上述I7457或是I7557的新穎用途，其可用來製造一種可治療癌症的醫藥品或是藥學組合物。 所製造出來的醫藥品或是藥學組合物會包括一藥學有效量之I7457或是I7557或是其藥學上可接受的鹽類；以及一藥學上可接受的輔劑。 在某些實施方式中，所述方法更包含在對該個體施用I7457或是I7557的同時、之前或之後，也對該個體施用另一種已知可改善癌症治療效果的藥劑。
本實驗結果顯示，本發明戈氏副擬桿菌菌株MTS01可抑制肺腫瘤生長。 一種用來延緩活體外多數癌症細胞生長的方法，包含施用一有效量如請求項9所述之6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類，其中該癌症為胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌或食道癌。 一種用來延緩活體外多數癌症細胞生長的方法，包含施用一有效量如請求項1所述之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類，其中該癌症為胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌或食道癌。 化學藥物治療 對81T/VGH細胞而言，細胞存活率分析結果顯示，經過20μM 之I7457與I7557處理48小時後，相較於對照組細胞，兩化合物均能夠有效地減少癌細胞數目至少50%(表5)。 類似的結果也出現在BE-3細胞的細胞存活率分析上，I7457與I7557在約20μM的濃度下，即可有效地抑制約50%的癌細胞生長(表6)。
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因此，本發明也提供用來治療哺乳類(特別是人類)之癌症的方法，包括對該個體施用所述內含本發明活性化合物之醫藥品或藥學組合物。 這類醫藥品或藥學組合物較佳是以可有效傳送所述組合物中活性化合物的途徑施用至一哺乳類(較佳是人類)身上適當或可產生欲求效果的位置。 適當的施用途經可以是例如主動或被動地經口、經鼻、經肺或經皮膜等方式；或是以經腸胃外的方式，如直腸栓劑、皮下注射、靜脈內注射、肌肉內注射、鼻腔內、眼用溶液或軟膏。 亦可將本發明之上述醫藥品或藥學組合物製成多種適用於黏膜給藥的劑型，如經頰和/或舌下藥物劑型單元，以遞送藥物穿過口腔黏膜。 可使用多種生物可降解且藥學可接受的高分子輔劑，此種輔劑可使得藥學組合物具有可接受的吸附效果以及所欲的藥物釋放模式，且可和經頰和/或舌下藥物劑型單元中所含的欲施用活性成分或其他成分相容。 一般來說，上述的高分子輔劑包含親水性聚合物，其可黏附至口腔黏膜的濕潤表面。
「化合物」、「組合物」、「活性化合物」、「藥劑」或「醫藥品」等詞在此可互相替換，且都是指當施用於一對象(人類或動物)時，能夠透過局部和/或全身性作用而誘發所欲藥學和/或生理反應的一種化合物或組合物。 一般來說，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量約0.1%至99%(重量%)。 在某些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少1%(重量%)。 在特定實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少5%(重量%)。
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如請求項15所述之方法，更包含在施用該有效量如請求項9所述之6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類之後，再對該胰臟癌施以放射線處理。 化學藥物治療 6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯(6-methylsulfonylhexyl isothiocyanate)於製造用以治療癌症之醫藥品的用途，上述癌症係選自由胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌及食道癌所組成之群組。 如請求項7所述之方法，更包含在施用該有效量如請求項1所述之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類之後，再對該胰臟癌施以放射線處理。
6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯(6-methylsulfinylhexyl isothiocyanate)於製造用以治療癌症之醫藥品的用途，上述癌症係選自由胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌及食道癌所組成之群組。 實施例3 I7457與I7557增強人類胰臟癌細胞對放射線處理之感受性 在本實施例中，發明人探究了本發明化合物I7457與I7557，對胰臟癌細胞株Panc-1及BxPc-3接受放射線處理的感受性之影響。 在此處「個體」或「患者」等詞係指可接受所述化合物和/或方法治療的動物，包括人類。 「個體」或「患者」在此涵蓋了雄性與雌性兩種性別，除非另有具體說明。
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本實施例的結果顯示，本發明戈氏副擬桿菌菌株MTS01可增加帶有肺癌之小鼠的存活率。 利用本發明實施例之戈氏副擬桿菌於治療肺癌時，可為但不限於以口服方式給藥。 其給藥時可與一般食物一同食用，因此製備包含戈氏副擬桿菌醫藥組成物時，該醫藥組成物可進一步包括蛋白質、單醣、雙醣、寡醣、低聚醣、多醣、碳水化合物、胺基酸、脂質、維他命或其任意組合的成分。
攝護腺癌經常出現骨頭轉移，像是髖關節、脊椎骨、骨盆等處。 轉移至骨頭後，會造成患者骨頭疼痛、患處骨頭容易骨折、脊髓神經受到壓迫導致下肢癱瘓、可能會讓骨頭中的鈣釋放到血液中，引發高血鈣症而讓人噁心無力。 當患者符合高風險攝護腺癌的任何一項指標，代表攝護腺癌的進展可能比較快、轉移機會比較高。 若評估患者健康狀況預計存活期超過五年，便會建議患者積極接受治療。 依據本發明，醫藥組成物可被當作食品添加物，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。 以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
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劉氏染色將細胞轉移到載玻片上並以溶液A(0.5 g的甲基藍以及1.7 g的伊紅黃，皆溶於1,000 ml的甲醇中)覆蓋。 45秒後，加入溶液B(1.3 g的天藍染料、1.4 g的甲基藍、23.38 g的磷酸氫二鈉與6.5 g的磷酸二氫鉀，皆溶於1,000 ml的蒸餾水中)，其中溶液B與溶液A的添加量為2：1。 「施用(administered、administering或、administration)」一詞在此係指直接施用所述的化合物或組合物，或施用活性化合物的前驅藥、衍生物、或類似物等可於對象體內形成該活性化合物之一相當用量者。 觀察療法：適用於低度或中度風險攝護腺癌，或預期生命少於10～15年者，由於進程較慢，所以醫師會建議積極監控並長期追蹤，等到腫瘤開始進展或惡化再行治療，9成以上病人死因為其他疾病。
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如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該醫藥組成物包含一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑、輔劑及/或食品添加劑。 一種戈氏副擬桿菌用於製備一治療肺癌之醫藥組成物的用途，其中該戈氏副擬桿菌的寄存編號為BCRC 。 在口服餵食戈氏副擬桿菌MTS01之後的21天，將各組小鼠犧牲，接而將肺移除並觀察肺的外觀。 本文所述之「有效濃度」係表示能直接治療帶有肺癌之個體所需戈氏副擬桿菌的數量。 有效濃度依所治療的生物種類或個體差異而可能不同，但可藉由例如濃度遞增試驗以實驗決定其有效濃度。 藉由測量有絲分裂不活化複合蛋白以及其上游調控蛋白的表現量，進一步探討I7457或I7557-誘發之有絲分裂不活化過程；上述有絲分裂不活化複合蛋白如Cdc2激酶與細胞週期素B1；而上游調控蛋白如Plk-1、Chk-1與Chk-2。
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除了轉移到骨頭之外，攝護腺癌也會轉移到肺臟、肝臟、腎上腺等內臟器官，根據多項研究，當攝護腺癌轉移至內臟器官，會比骨頭轉移造成更負面的影響，生活品質和存活率皆進一步下降。 值得注意的是，雖然攝護腺癌經常給人較溫和的印象，但請別小看攝護腺癌，因為部分攝護腺癌生長較快、容易轉移，對生命造成威脅。 如本文中所使用的，“治療”或“治療”意指緩解、減少、改善、減輕或控制一疾病或障礙的一或多個臨床徵兆，以及降低、停止或逆轉一正在被治療中的病況或症狀之嚴重性的進展。 如本文中所使用的，用語“細菌成分”意為培養細菌時，該菌直接或間接相關之衍生物質，包括但不限於該細菌之代謝產物、該細菌之結構、細菌相關活性及非活性成分等。 如本文中所使用的，用語“代謝產物”意為培養細菌時，經該細菌代謝後所分泌至細菌培養液中之物質，包含培養該菌的培養液。
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利用放射線照射攝護腺，破壞分裂繁殖的癌細胞，屬於根治性治療，可合併荷爾蒙療法。 但放射線可能照射到攝護腺周邊組織，常見為膀胱和直腸，傷及膀胱黏膜及直腸黏膜，3～5年後可能大、小便出血。 格里森分數愈高，代表腫瘤的分化愈差，因此當格里森分數大於8分時，患者較可能出現轉移，存活率也較差。 在台灣，約有一半被診斷攝護腺癌的患者屬於第三期或第四期攝護腺癌，可能已有淋巴轉移或遠端轉移的狀況。
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在另一些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少10%(重量%)。 在又另一些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少25%(重量%)。 如所述，抗藥性是指癌細胞的一種狀態，尤指對單一治療性藥劑發展出抗性。 舉例來說，癌細胞可能會對諸如敏畢瘤、敏克瘤和溫諾平之類的長春花生物鹼類；諸如阿黴素、丹阿黴素及艾達黴素之類的蒽環黴素；微管蛋白安定藥物(紫杉醇)或酪胺酸激酶活性抑制劑(如，達沙替尼、尼祿替尼和伊馬替尼)發展出抗藥性。 目前用來治療癌症的標準方法如下：手術切除、化學藥物治療、放射線治療、免疫治療及生物性治療等；在這些方式中，以手術切除及化學藥物治療最常被採用。 4.荷爾蒙療法：單獨使用僅能壓制癌細胞，無法根治，治療方式包含定期施打荷爾蒙針，一次性切除雙側睪丸，有時會伴隨合併經尿道攝護腺切除術。
本實施例的結果顯示，本發明戈氏副擬桿菌菌株MTS01可有效地改善LLC引起的個體體重減輕的問題。 該小鼠係飼養在無特定病原體的設施中，並按照美國國立衛生研究院的指導原則進行治療。 化學藥物治療 在以下實驗中，對C57BL/6J雄性小鼠在尾靜脈中注射路易氏肺癌細胞(1×106細胞)，然後在整個實驗過程中監測腫瘤的生長及體積。
圖中所示的結果顯示I7457與I7557皆可有效減少細胞數目，且此一效果與劑量相關；當使用20 μM的試驗化合物時，可使抗藥性CML細胞的數目至少減少為對照組細胞的65%。 實施例1 I7457與I7557可抑制抗藥性CML K562R細胞之生長 利用上文「材料與方法」部分所述的步驟進行誘導而得到對伊馬替尼具抗性的人類CML細胞株K562R。 分別利用細胞存活與細胞週期分析以及免疫墨點分析與劉氏染色法來評估I7457與I7557的抑制生長活性。
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而與病理對照組相較之下，實驗組小鼠的肺腫瘤數目有顯著的減少，而比較組則無此現象。 圖2是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的平均存活時間上的效用之數據圖。 在本發明的一實施例中，該醫藥組成物增加一帶有肺癌之個體的存活率、平均存活時間及體重，且抑制肺腫瘤生長。 本發明化合物(即，I7457或是I7557)可經由口服(如，口服用膠囊、懸浮液或藥錠)、或腸胃外等適當方法施用。 腸胃外施用方式包括例如肌肉內注射、靜脈注射、皮下注射或腹膜內注射等系統性方式施用。 或是，也可透過穿皮膜方式施用，如局部皮膚塗抹或是吸入性(如支氣管內、鼻腔內、口腔內或鼻滴劑等)；或是直腸內方式施用。
這類油性溶液或懸浮液中也可包含用來稀釋的醇類或羧甲基纖維素或類似的分散劑。 也可使用其他常用的界面活性劑(如，Tweens或Spans系列)或乳化劑，或藥學領域製造配方時常用來增強生物可利用性的藥劑。 在某些實施方式中，所述方法更包含在施用本發明化合物之前，先對該癌症施以放射線預處理。 本揭示內容至少有一部分是肇因於一種從山葵中分離出來的異硫氰酸酯類化合物，特別是6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯及其衍生物，6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯，具有抑制癌細胞(特別是，具有抗藥性之癌細胞)生長活性，這樣的發現而發展出來的。 因此，可將這兩種異硫氰酸酯類化合物，作為能治療癌症之醫療藥劑的先導化合物。